HSP 78 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-413434

Visão geral

CLPB codifica a chaperona mitocondrial humana AAA+ HSP78, uma desagregase proteica que coopera com os sistemas mitocondriais HSP70/HSP60 para extrair e refazer o enovelamento de proteínas mal enoveladas ou agregadas na matriz. Por meio do remodelamento, dependente de ATP, de complexos proteicos, a CLPB sustenta a proteostase mitocondrial, a integridade da cadeia respiratória e a adaptação celular ao stresse proteotóxico e oxidativo. A disfunção ligada à CLPB tem sido associada a fenótipos de doença mitocondrial e a alterações da homeostase metabólica, destacando a sua relevância para vias que controlam a produção de energia, as respostas ao stresse e o controlo de qualidade. Como um nó na vigilância de proteínas mitocondriais, a HSP78 é frequentemente estudada em contextos que envolvem fosforilação oxidativa comprometida, desequilíbrio redox e sinalização de apoptose induzida por stresse.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO HSP 78 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene CLPB em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do CLPB, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do CLPB na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína HSP 78.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de CLPB para a investigação da sinalização de HSP 78, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) CLPB críticos para a função HSP 78
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos CLPB para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo HSP 78 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo HSP 78 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus CLPB. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo HSP 78 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR HSP 78 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia CLPB para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo CLPB definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.