HSP 75 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402640-ACT

TRAP1（HSP 75）は、ミトコンドリア基質内でのタンパク質のフォールディングと品質管理を制御し、呼吸鎖の完全性と細胞のストレス耐性を支える、ミトコンドリア局在性のHSP90ファミリーシャペロンである。ミトコンドリア膜透過性遷移、活性酸素種（ROS）恒常性、ならびに生体エネルギーのフラックスを調節することで、TRAP1はシャペロン活性を代謝適応およびプロテオスタシス経路と結び付ける。TRAP1依存的なミトコンドリア機能の再配線は、多様な細胞状況において、アポトーシス感受性の変化、酸化ストレス応答、そして酸化的リン酸化と解糖系の切り替えに関連付けられてきた。TRAP1の発現や活性の破綻は、ミトコンドリア機能不全とタンパク質毒性ストレスが病態に寄与する腫瘍生物学、神経変性、その他の疾患と関連していることが示唆されている。

HSP 75 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性TRAP1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

HSP 75 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における TRAP1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTRAP1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性HSP 75の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTRAP1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるHSP 75依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTRAP1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるHSP 75経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。