Plásmido Doble Nickase (h) HSF4: sc-403850-NIC

HSF4 (factor de transcripción 4 de choque térmico) es un factor de transcripción que se une al ADN y coordina la proteostasis al regular las proteínas de choque térmico y otros genes sensibles al estrés, con funciones destacadas en programas de diferenciación celular. En los tejidos oculares, HSF4 contribuye a la maduración de las células de las fibras del cristalino y al mantenimiento de la homeostasis proteica, procesos estrechamente vinculados a la organización del citoesqueleto, las redes de chaperonas y la protección frente a la agregación de proteínas. La desregulación de la actividad de HSF4 se ha asociado con opacidades hereditarias del cristalino y fenotipos relacionados con cataratas, lo que refleja la sensibilidad del cristalino a las alteraciones del control de calidad de las proteínas. Como nodo en los circuitos transcripcionales de respuesta al estrés, HSF4 se estudia por sus efectos sobre las transiciones de estado celular, la regulación transcripcional bajo estrés proteotóxico y los perfiles de expresión de chaperonas aguas abajo.

HSF4 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus HSF4 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de HSF4. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de HSF4. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con HSF4 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.