HRC CRISPR Activationプラスミド (m): sc-420947-ACT

マウスHrcは、ヒスチジンに富むカルシウム結合タンパク質（HRC）をコードしている。HRCは筋小胞体の内腔側に存在する構成要素で、リアノジン受容体の活性およびSERCA依存的な再取り込みに影響することで、Ca²⁺の貯蔵と放出を調節する。興奮–収縮連関と細胞内カルシウム恒常性を形成することにより、HRCは心筋細胞および骨格筋の機能に寄与しており、そこでは精密なCa²⁺サイクリングが収縮性やストレス応答を制御している。Hrc発現の異常やCa²⁺ハンドリングの変化は、心臓リモデリング、不整脈発生機序、ならびにミオパチー関連表現型の文脈で一般的に研究されている。筋小胞体（SR）のカルシウム動態における結節的な制御因子として、HRCはカルシウムシグナル伝達、プロテオスタシス、そして生理的・病理的刺激に対する筋の適応を制御する経路と関連する。

HRC CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Hrcの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

HRC CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Hrc 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はHrc転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性HRCの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のHrc遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるHRC依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびHrc発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるHRC経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。