Particules Lentivirales d'Activation (h) HP1γ: sc-417205-LAC

CBX3 code la protéine 1 gamma de l’hétérochromatine (HP1γ), un lecteur de la chromatine qui se lie à H3K9me2/3 via son chromodomaine et coordonne l’organisation de l’hétérochromatine, la régulation transcriptionnelle et la stabilité du génome. HP1γ participe au silençage épigénétique, à la réponse aux dommages de l’ADN, au contrôle du timing de réplication et au traitement de l’ARN en servant d’échafaudage à des complexes associés à la chromatine et en modulant l’architecture de la chromatine à un niveau supérieur. Par ces fonctions, CBX3 influence la progression du cycle cellulaire, les programmes de différenciation et les réseaux transcriptionnels sensibles au stress. Des altérations de l’activité et de la localisation de CBX3/HP1γ ont été associées à des états épigénétiques dérégulés observés dans de nombreux contextes cancéreux ainsi que dans d’autres maladies liées à des dysfonctionnements de la chromatine, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques du contrôle transcriptionnel et du maintien du génome.

Les particules d'activation lentivirales HP1γ (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de CBX3 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales HP1γ (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription CBX3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de HP1γ. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif CBX3 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.