HoxB13 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401878-ACT

HOXB13 codifica o fator de transcrição homeobox HoxB13, um regulador de ligação ao DNA específico de sequência que ajuda a estabelecer a identidade posicional e programas de linhagem durante o desenvolvimento embrionário e a diferenciação tecidual. Ao controlar redes transcricionais que influenciam decisões de destino celular, maturação epitelial e padronização de órgãos, o HoxB13 contribui para a regulação dependente do contexto da proliferação e da diferenciação. A desregulação da expressão ou da função de HOXB13 tem sido associada a programas alterados de expressão gênica em tecidos responsivos a hormônios, com particular relevância para a biologia da próstata e estados transcricionais associados ao câncer. Como fator de transcrição nuclear, o HoxB13 é amplamente estudado por seus papéis em vias de desenvolvimento e em circuitos transcricionais relevantes para doenças.

HoxB13 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de HOXB13 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

HoxB13 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus HOXB13 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição HOXB13, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de HoxB13. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus HOXB13 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de HoxB13 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via HoxB13 em células tumorais com expressão de HOXB13 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.