HoxA2 Double Nickaseプラスミド (h): sc-403732-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- HoxA2 Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- HoxA2ダブルニカースプラスミド（h）およびHoxA2ダブルニカースプラスミド（h2）は、HOXA2を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
HoxA2 Double Nickaseプラスミド (h) | sc-403732-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
HoxA2 Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-403732-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
HOXA2は、ホメオボックス型転写因子HoxA2をコードしており、配列特異的にDNAへ結合して転写を制御する因子である。HoxA2は胚発生における前後軸パターニングと体節アイデンティティの確立に寄与し、とりわけ後脳の菱脳節（rhombomere）の発生および第2咽頭弓由来組織の形成に重要である。HoxA2は、発生シグナルをクロマチン状態や転写プログラムと統合し、系譜決定、神経分化、形態形成過程を制御する。HOXA2の発現異常は、複数のがんや分化に関連する状況で報告されており、ホメオボックス遺伝子ネットワークの変調が増殖、浸潤、細胞運命の安定性を乱し得る。発生制御因子としてのHOXA2は、エンハンサー–プロモーターの制御原理、転写階層、組織特異的遺伝子発現を維持するエピジェネティック状態を解明する目的で、しばしば研究対象となっている。
HoxA2 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における HOXA2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、HOXA2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、HOXA2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、HOXA2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。