Hox11 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-423423

概要

Tlx1（Hox11）はTALEクラスのホメオボックス転写因子で、胚発生におけるパターン形成と器官形成を制御し、マウスでは脾臓の発生および造血系統の運命決定において顕著な役割を担います。配列特異的な調節エレメントに結合し、PBX/MEISタンパク質などの補因子と協調することで、Hox11は前駆細胞の増殖、分化、組織の区画化を制御する転写プログラムを調節します。TLX1/Hox11の活性が異常に制御されると、発生プログラムの逸脱に関連し、とくにT系統白血病の発症モデルにおける腫瘍性の転写ネットワークへの関与が示唆されています。実験系においてTlx1は、発生遺伝子ネットワークの転写制御および形質転換に伴うその再配線を解明するための、扱いやすい研究入口となります。

Hox11 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるTlx1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Tlx1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Tlx1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Hox11タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Hox11シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Tlx1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Hox11の機能に不可欠なTlx1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Tlx1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Hox11 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびHox11 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Tlx1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Hox11 HDRプラスミド（m）および Hox11 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTlx1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTlx1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。