hnRNP E2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402274-ACT

PCBP2 codifica a ribonucleoproteína nuclear heterogênea E2 (hnRNP E2), uma proteína ligante de RNA que reconhece elementos ricos em citosina (C) para coordenar a regulação gênica pós-transcricional. A hnRNP E2 influencia o splicing, a estabilidade, a poliadenilação e a tradução do mRNA, moldando assim a produção de proteínas em resposta a sinais celulares e ao estresse. Ela contribui para a montagem de complexos ribonucleoproteicos e interage com redes que controlam o metabolismo de RNA e o início da tradução. A atividade desregulada de PCBP2/hnRNP E2 tem sido associada a programas alterados de expressão gênica em contextos de biologia do câncer, utilização de RNA viral e sinalização inflamatória, o que sustenta seu estudo em mecanismos de regulação gênica e controle do estado celular.

hnRNP E2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PCBP2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

hnRNP E2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PCBP2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PCBP2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de hnRNP E2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PCBP2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de hnRNP E2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via hnRNP E2 em células tumorais com expressão de PCBP2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.