hnRNP A1 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-420895-ACT

マウスHnrnpa1は、豊富に存在するRNA結合タンパク質hnRNP A1をコードしており、pre-mRNAに結合して選択的スプライシング、mRNAの核外輸送、安定性、翻訳を協調的に制御する。hnRNP A1は核と細胞質の間をシャトル移行することでも知られ、ストレス顆粒の動態やRNA品質管理にも関与し、RNAプロセシングを細胞ストレス応答と結び付けている。転写産物全体にわたる広範な制御を通じて、hnRNP A1はスプライソソーム機能、DNA損傷応答、増殖関連シグナル伝達プログラムなどの経路に影響を与える。hnRNP A1の発現量や細胞内局在の異常は、スプライシングパターンの変化やRNA代謝の破綻と関連づけられており、神経変性疾患やがん生物学に関わることから、転写後制御の作用機序研究で広く用いられる重要な標的となっている。

hnRNP A1 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Hnrnpa1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

hnRNP A1 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Hnrnpa1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はHnrnpa1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性hnRNP A1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のHnrnpa1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるhnRNP A1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびHnrnpa1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるhnRNP A1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。