hnRNP A1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400704-ACT

HNRNPA1は、ヒトのヘテロ核リボヌクレオタンパク質A1（hnRNP A1）をコードする遺伝子であり、スプライソソーム構成要素やRNA輸送機構との相互作用を介して、pre-mRNAスプライシング、選択的スプライシング（代替エクソン選択）、mRNAの核外輸送、翻訳制御を調整する豊富なRNA結合タンパク質である。hnRNP A1はテロメア維持やストレス顆粒の動態にも関与し、RNA代謝と細胞性ストレス応答を結び付けている。HNRNPA1依存的なRNAプロセシングの破綻やタンパク質凝集は、神経変性および神経筋系の表現型と関連付けられており、また転写産物アイソフォームの再編成が増殖・生存経路に影響する複数のがんの文脈において、hnRNP A1活性の変化が報告されている。トランスクリプトームの可塑性を司る中核的制御因子として、hnRNP A1はRNA安定性、DNA損傷応答に隣接する遺伝子発現プログラム、ならびにプロテオスタシスを制御する経路で頻繁に研究されている。

hnRNP A1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性HNRNPA1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

hnRNP A1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における HNRNPA1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はHNRNPA1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性hnRNP A1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のHNRNPA1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるhnRNP A1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびHNRNPA1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるhnRNP A1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。