HNF-3β CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-420890

Übersicht

Foxa2 kodiert den Forkhead-Box-Transkriptionsfaktor HNF-3β, einen Pioneer-Faktor, der an verdichtetes Chromatin bindet, um endodermale Genregulationsprogramme zu etablieren und aufrechtzuerhalten. In der Maus koordiniert HNF-3β transkriptionelle Netzwerke, die die Entwicklung von Vorderdarm und Chorda dorsalis, die Spezifizierung der hepato-pankreatischen Zelllinie sowie die epitheliale Differenzierung steuern, und integriert dabei Signale aus Signalwegen wie Wnt, TGF-β/SMAD, Hedgehog und dem nukleären Rezeptor-vermittelten Stoffwechsel. In adulten Geweben beeinflusst FOXA2 die Glukose- und Lipidhomöostase, indem es hepatische Stoffwechselgene reguliert und die Identität endokriner und epithelialer Zellen moduliert. Eine fehlregulierte FOXA2-Aktivität wurde mit Entwicklungsdefekten sowie krankheitsrelevanten Zuständen in Verbindung gebracht, die mit veränderter Differenzierung, epithelialer Plastizität und Stoffwechselstörungen einhergehen, was seinen Einsatz in mechanistischen Studien zur transkriptionellen Kontrolle unterstützt.

Das HNF-3β CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Foxa2-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Foxa2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Foxa2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die HNF-3β-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Foxa2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der HNF-3β-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Foxa2-Exone abzielen, die für die HNF-3β-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Foxa2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom HNF-3β CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom HNF-3β CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Foxa2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das HNF-3β HDR-Plasmid (m) und HNF-3β HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Foxa2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Foxa2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.