HNF-3β Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400210-ACT

FOXA2 codifica o fator nuclear de hepatócitos 3-beta (HNF-3β), um fator de transcrição do tipo winged-helix que atua como regulador pioneiro da acessibilidade da cromatina e da expressão gênica específica de linhagem. Ele coordena programas de desenvolvimento e funções homeostáticas em tecidos derivados do endoderma, incluindo fígado, pâncreas e pulmão, ao controlar redes envolvidas na diferenciação epitelial, no metabolismo de glicose e lipídios e na identidade de células secretoras. O FOXA2 interage com vias de sinalização como Wnt/β-catenina, TGF-β e Notch para modular estados transcricionais e a plasticidade celular. A atividade desregulada de FOXA2 tem sido associada a alterações na regulação metabólica e a programas de diferenciação aberrantes observados em diversos contextos relevantes para doenças, incluindo biologia do câncer e disfunção endócrina.

HNF-3β O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de FOXA2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

HNF-3β O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus FOXA2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição FOXA2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de HNF-3β. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus FOXA2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de HNF-3β no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via HNF-3β em células tumorais com expressão de FOXA2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.