Plasmide CRISPR d'Activation (h) HMP19: sc-407313-ACT

Le gène humain **HMP19** code HMP19, une petite protéine en grande partie non caractérisée, dont l’annotation fonctionnelle reste limitée dans les bases de données de voies de signalisation actuelles. Les données transcriptomiques disponibles suggèrent des profils d’expression restreints à certains types cellulaires, ce qui en fait une cible utile pour étudier la régulation génique dépendante du contexte et les programmes transcriptionnels en aval. Comme les données mécanistiques demeurent rares, la perturbation contrôlée de l’expression de HMP19 peut aider à définir son rôle dans l’homéostasie cellulaire, y compris d’éventuels liens avec les états de différenciation et la signalisation en réponse au stress. Les signatures d’expression dérégulées impliquant des loci peu annotés tels que HMP19 sont de plus en plus examinées dans les études omiques axées sur les maladies afin de prioriser des régulateurs candidats pour des validations fonctionnelles ultérieures.

HMP19 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de HMP19 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

HMP19 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus HMP19 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription HMP19, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de HMP19. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus HMP19 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de HMP19 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie HMP19 dans les cellules tumorales présentant une expression de HMP19 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.