Each CRISPR/Cas9 Knockout (KO) Plasmid product consists of a pool of 3 plasmids designed to ensure identification and cleavage of a specific gene for maximum knockout efficiency. Each plasmid encodes a unique 20 nt sequence derived from the GeCKO (v2) library.
HM74 CRISPR/Cas9 KO质粒 (m): sc-429832
- 针对种属：mouse
- 20 µg 纯化的即用型的质粒DNA，最多可供20次转染
- HM74 CRISPR/Cas9 基因敲除（KO）质粒（m） 是一组质粒混合物，每种质粒均编码 Cas9 核酸酶及针对特定靶点的 20 核苷酸引导 RNA（gRNA），其设计基于 GeCKO v2 文库中的序列，旨在实现最高的基因敲除效率
- gRNA序列引导Cas9在HM74基因组位点诱导位点特异性双链断裂（DSBs），从而通过非同源末端连接（NHEJ）实现基因敲除
- 嘌呤霉素抗性基因和 RFP 基因两侧有 LoxP 位点，因此在建立稳定的基因敲除细胞系后，可以通过 Cre 重组酶（Cre 向量：sc-418923）去除选择标记。
- 转染后，基因敲除效率可以用抗体：HM74: sc-377292，通过WB, IF或者IHC分析
订购信息
| 产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格 | 数量 | 收藏夹 | |
HM74 CRISPR/Cas9 KO质粒 (m) | sc-429832 | 20 µg | $397.00 |
概述
Hcar2 编码 HM74（也称为 GPR109A），是一种与 Gi/o 蛋白偶联的 G 蛋白偶联受体（GPCR），可响应烟酸以及 β-羟丁酸等内源性代谢物，从而调控细胞内 cAMP 信号传导。在小鼠的免疫组织和屏障组织中，HM74 通过依赖 cAMP 的通路及其下游转录程序影响趋化、炎性介质产生以及细胞对代谢的适应。受体活性还与巨噬细胞和中性粒细胞反应的调节、上皮稳态以及脂质相关信号网络有关。因此，在以 GPCR 介导的免疫—代谢串扰为关键变量的炎症、代谢应激和组织损伤模型中，Hcar2/HM74 信号的改变具有重要意义。
HM74 CRISPR/Cas9 KO质粒（m）是一组旨在针对性地破坏mouse细胞系中Hcar2基因的质粒池。每条质粒均共表达一种独特的单引导RNA（sgRNA），该sgRNA针对Hcar2基因内的特定位点，并携带来自化脓性链球菌的Cas9核酸酶。这些质粒还编码GFP，可通过荧光显微镜或流式细胞术对成功转染的细胞进行荧光标记和富集。
多引导设计提高了在Cas9介导的双链断裂形成后，产生破坏Hcar2开放阅读框的插入或缺失（indels）的概率。CRISPR/Cas9系统引入的DNA断裂通过内源性非同源末端连接（NHEJ）途径修复，通常会导致移码突变，从而使HM74蛋白表达失活。
该CRISPR敲除系统能够高效构建Hcar2缺失的细胞模型，用于HM74信号传导研究、功能基因组学研究、癌症生物学研究以及人类细胞系中治疗反应的评估。
主要特点
- 针对对 HM74 功能至关重要的 Hcar2 外显子的 sgRNA
通过单质粒共表达 SpCas9 和 sgRNA 以简化递送过程
GFP 报告基因用于识别转染细胞
针对多个 Hcar2 基因组位点的质粒池以提高敲除效率
兼容转染递送
设计变体
CRISPRs +/- HDR
- 由 HM74 CRISPR/Cas9 KO 质粒 (m) 和 HM74 CRISPR/Cas9 KO 质粒 (m2) 编码的 gRNA 分别靶向 Hcar2 基因座内的不同位点。可能提供其中一种或两种靶向设计。具体供应情况请参见相关产品。
由 HM74 HDR 质粒（m）编码的 HDR 供体构建体以及 HM74 HDR质粒（m2）编码的HDR供体构建体包含一个嘌呤霉素抗性盒和一个RFP报告基因，其两侧由Hcar2同源臂包围，以支持在与CRISPR/Cas9敲除设计对应的特定Hcar2靶位点进行同源导向修复。HDR供体的供应情况可能有所不同。请查看“相关产品”了解供应情况。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。