Plasmide Double Nickase (h) HLF: sc-404752-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) HLF correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide HLF Double Nickase (h) et le plasmide HLF Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant HLF. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: HLF Antibody (4D8): sc-134359
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) HLF | sc-404752-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) HLF | sc-404752-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Le gène humain HLF (hepatic leukemia factor) code un facteur de transcription PAR bZIP qui se fixe à des éléments spécifiques des promoteurs afin de coordonner l’expression génique régulée par le rythme circadien et des programmes transcriptionnels spécifiques aux tissus. HLF participe à des réseaux transcriptionnels contrôlant la différenciation, l’homéostasie métabolique et les réponses au stress cellulaire, via la régulation de gènes cibles en aval dans le foie et les lignées hématopoïétiques. Une activité dérégulée de HLF a été associée à la biologie des hémopathies malignes, notamment via une reprogrammation transcriptionnelle induite par des fusions, et a également été étudiée dans des contextes de perturbation du rythme circadien et de phénotypes métaboliques altérés. En tant que protéine nucléaire se liant à l’ADN, HLF est fréquemment étudié pour son rôle dans les circuits de régulation des gènes et le maintien des lignages.
HLF Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus HLF dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de HLF. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de HLF. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de HLF.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.