Histone Deacetylase 5 (HDAC5) Double Nickaseプラスミド (m): sc-420819-NIC

Hdac5 は、ヒストン脱アセチル化酵素 5（HDAC5）をコードする。HDAC5 はクラス IIa に属する HDAC であり、シグナル応答性のクロマチン制御因子として、分化、代謝、ストレス適応を司る転写プログラムを統合的に調整する。HDAC5 は CaMK や AMPK などのキナーゼによるリン酸化に応答して核と細胞質の間をシャトルし、カルシウムおよびエネルギーシグナルを、遺伝子発現のエピジェネティック制御と結び付ける。MEF2 などの転写因子との相互作用を介して、神経および筋の遺伝子ネットワークを調節し、活動依存的な転写リモデリングに寄与する。HDAC5 活性の破綻は、炎症シグナルの変化、心筋および骨格筋のリモデリング、ならびに神経行動学的表現型と関連づけられており、心代謝疾患や神経発達疾患のモデルにおける重要性を支持している。

Histone Deacetylase 5 (HDAC5) ダブルニカースプラスミド（m）は、mouse 細胞株における Hdac5 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Hdac5内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Hdac5の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Hdac5が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。