Histamine H1 Receptor Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-401393-LAC

HRH1 codifica il recettore umano dell’istamina H1 (H1R), un GPCR di classe A che si accoppia principalmente a Gq/11 per attivare la fosfolipasi Cβ, aumentare il Ca2+ intracellulare e stimolare la segnalazione dipendente da PKC. Le risposte a valle includono la modulazione delle vie MAPK/ERK, delle dinamiche del citoscheletro e di programmi trascrizionali che modellano la segnalazione infiammatoria, la permeabilità vascolare e il tono della muscolatura liscia. L’attività di H1R interseca inoltre l’eccitabilità neuronale e la comunicazione neuro-immune, influenzando la veglia, il prurito e l’elaborazione del dolore. Una segnalazione HRH1 deregolata è spesso studiata in modelli di allergia e infiammazione cronica, iperreattività delle vie aeree e fenotipi cutanei e neuroinfiammatori.

Le particelle di attivazione lentivirale Histamine H1 Receptor (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di HRH1 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale Histamine H1 Receptor (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione HRH1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di Histamine H1 Receptor. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo HRH1 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.