Histamine H1 Receptor Double Nickaseプラスミド (h): sc-401393-NIC

HRH1 はヒトのヒスタミン H1 受容体（H1R）をコードしており、主に Gq/11 に共役するクラスAの Gタンパク質共役受容体（GPCR）である。H1R はヒスタミンのシグナルをホスホリパーゼCの活性化、イノシトールリン酸の産生、細胞内 Ca2+ の動員、ならびにプロテインキナーゼC依存的なプログラムへと変換する。H1R シグナルは MAPK/ERK および NF-κB 経路とも交差し、免疫系および上皮の文脈において、血管トーヌスと透過性、平滑筋収縮、炎症性遺伝子発現の制御に関与する。HRH1 の活性や発現の変化は、気道過敏性、アレルギー性炎症、そう痒、神経免疫調節と関連づけられており、バリア機能や神経機能に対するヒスタミン作動性制御を研究する上で有用な結節点となる。さらに HRH1 は、受容体の脱感作、β-アレスチン介在性トラフィッキング、リガンド・バイアス（偏向）シグナル伝達を解析するためのモデル GPCR としても利用されている。

Histamine H1 Receptor ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における HRH1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、HRH1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、HRH1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、HRH1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。