HGFA Double Nickaseプラスミド (h): sc-404422-NIC

HGFACは肝細胞増殖因子アクチベーター（HGFA）をコードしており、HGFAは分泌型のセリンプロテアーゼとして、一本鎖のプロHGFを活性型HGFへと変換し、その結果としてMET受容体シグナル伝達を増強します。このプロテオリシス段階は、細胞外プロテアーゼネットワークを、上皮―間葉相互作用、細胞運動性、増殖、組織リモデリングを制御する下流経路へと結び付け、さらに凝固系および線溶系に関連するカスケードとのクロストークも伴います。HGF/HGFA–MET軸の活性制御の破綻は、異常な間質―上皮シグナル伝達、浸潤性増殖プログラム、再生応答の変化に関与するとされており、HGFACはヒト細胞における細胞周囲プロテオリシスおよび増殖因子活性化の機構研究に有用な結節点となります。

HGFA ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における HGFAC 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、HGFAC内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、HGFACの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、HGFACが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。