HGF Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400433

Visão geral

O fator de crescimento de hepatócitos (HGF) é uma citocina pleiotrópica secretada que se liga ao receptor tirosina-quinase MET para regular a comunicação epitélio–mesênquima, a motilidade celular, a sobrevivência, a proliferação e a morfogénese. A sinalização HGF–MET ativa as vias MAPK/ERK, PI3K–AKT, STAT e das GTPases da família Rho para coordenar a remodelação tecidular, a reparação de feridas e o desenvolvimento de órgãos. A expressão desregulada de HGF ou a ativação aberrante da via está associada a programas de crescimento invasivo, interações estroma–tumor e a microambientes angiogénicos e inflamatórios alterados em múltiplos contextos patológicos. Como fator parácrino produzido por células mesenquimatosas, o HGF é frequentemente estudado em sistemas de co-cultura e de meio condicionado para investigar dinâmicas de sinalização conduzidas pelo microambiente.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO HGF (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene HGF em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do HGF, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do HGF na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína HGF.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de HGF para a investigação da sinalização de HGF, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) HGF críticos para a função HGF
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos HGF para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo HGF Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo HGF Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus HGF. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo HGF Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR HGF (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia HGF para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo HGF definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.