HGF Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400433-ACT

O fator de crescimento de hepatócitos (HGF) é uma citocina pleiotrópica secretada que sinaliza principalmente por meio do receptor tirosina-quinase MET para regular as interações epitélio–mesênquima, a sobrevivência celular, a proliferação, a motilidade e a morfogênese ramificada. A ativação de HGF–MET engaja as vias downstream PI3K–AKT, RAS–MAPK, STAT e sinalização de adesão focal, integrando sinais que moldam o reparo e a remodelação tecidual. A expressão desregulada de HGF ou a hiperativação da via é frequentemente estudada na invasão de células tumorais, metástase, angiogênese e no crosstalk entre estroma e tumor, bem como em microambientes fibróticos e inflamatórios. Como um modulador dependente do contexto da plasticidade celular, o HGF é amplamente utilizado para investigar a sinalização parácrina e fenótipos direcionados pelo microambiente em modelos celulares humanos.

HGF O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de HGF sem alterar a sequência de ADN subjacente.

HGF O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus HGF em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição HGF, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de HGF. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus HGF nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de HGF no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via HGF em células tumorais com expressão de HGF silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.