Particules Lentivirales d'Activation (h) HES1: sc-400387-LAC

HES1 code un répresseur transcriptionnel de type hélice-boucle-hélice (bHLH) qui agit comme effecteur central de la signalisation Notch afin de maintenir les états progéniteurs et de freiner les programmes de différenciation spécifiques de lignée. En se liant aux motifs N-box/E-box et en recrutant des complexes corépresseurs, HES1 met en place des circuits d’expression génique oscillatoire qui coordonnent la progression du cycle cellulaire, les choix de destin neuronal et hématopoïétique, ainsi que la mise en place des tissus. Son activité s’articule avec des voies du développement, notamment Wnt/β-caténine, Hedgehog et TGF-β, façonnant des sorties transcriptionnelles dépendantes du contexte. Une expression dérégulée de HES1 a été associée à des états de différenciation et de prolifération altérés dans de multiples contextes pathologiques, ce qui en fait un nœud utile pour des études mécanistiques du contrôle transcriptionnel piloté par les voies de signalisation.

Les particules d'activation lentivirales HES1 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de HES1 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales HES1 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription HES1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de HES1. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif HES1 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.