Plasmide CRISPR d'Activation (h) Heme Oxygenase 1/HMOX1: sc-400157-ACT

HMOX1 (hème oxygénase 1) est une enzyme inductible de réponse au stress qui catalyse la dégradation de l’hème en biliverdine, fer libre et monoxyde de carbone, reliant le métabolisme de l’hème à l’équilibre rédox cellulaire. Son expression est fortement régulée par le stress oxydant et électrophile via des voies comprenant notamment NRF2–KEAP1 et la signalisation inflammatoire, et elle module la fonction mitochondriale, la gestion du fer et des programmes antioxydants cytoprotecteurs. L’activité de HMOX1 influence la polarisation des macrophages, les réponses endothéliales et l’adaptation des tissus à l’hypoxie et à l’inflammation, ce qui en fait un marqueur largement utilisé et un nœud mécanistique central en biologie du stress. Une dérégulation de HMOX1 a été associée à des processus cardiométaboliques et neuro-inflammatoires, au remodelage du microenvironnement tumoral et à une susceptibilité modifiée aux lésions oxydatives, soulignant sa large pertinence pour la modélisation des maladies et l’exploration des voies de signalisation.

Heme Oxygenase 1/HMOX1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de HMOX1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Heme Oxygenase 1/HMOX1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus HMOX1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription HMOX1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Heme Oxygenase 1/HMOX1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus HMOX1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Heme Oxygenase 1/HMOX1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Heme Oxygenase 1/HMOX1 dans les cellules tumorales présentant une expression de HMOX1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.