HEL308 Lentiviral Activation Particles (h): sc-404447-LAC

Humanes **HELQ** kodiert die DNA-Helikase **HEL308**, eine ATP-abhängige 3′→5′-Helikase, die zur Genomstabilität beiträgt, indem sie ins Stocken geratene Replikationsgabeln und Rekombinationsintermediate verarbeitet. HEL308/HELQ ist an der Toleranz gegenüber DNA-Schäden, an Reaktionen auf Replikationsstress und an der Reparatur von Interstrang-Crosslinks beteiligt und steht dabei in Wechselwirkung mit der homologen Rekombination sowie der S‑Phasen-Checkpoint-Signalgebung, um chromosomale Aberrationen zu begrenzen. Eine Störung oder Fehlregulation HELQ-assoziierter Signalwege wurde mit einer beeinträchtigten Erholung von Replikationsgabeln und einer erhöhten Mutationslast in Verbindung gebracht, was HELQ für Studien zur Krebsanfälligkeit und zu Phänotypen von DNA-Reparaturdefekten relevant macht. Als replikationsgekoppelte Helikase wird HEL308 häufig in Kontexten untersucht, in denen Gabelschutz, Läsionsumgehung und Rekombinationskontrolle unter genotoxischem Stress über das Zellschicksal entscheiden.

HEL308 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente HELQ-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

HEL308 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der HELQ-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen HEL308-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen HELQ-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.