HECTD3 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406532

Descripción general

HECTD3 codifica una ligasa E3 de ubiquitina con dominio HECT que cataliza la transferencia de ubiquitina a proteínas diana, determinando su estabilidad, localización y la salida de sus señales. Se ha relacionado con la regulación de la señalización innata e inflamatoria, incluida la modulación de vías asociadas a NF-κB e interferón mediante el control dependiente de ubiquitina de componentes de la ruta. Al ajustar la proteostasis y la transducción de señales, HECTD3 puede influir en las respuestas al estrés celular, la proliferación y la apoptosis. Los programas de ubiquitinación desregulados en los que participa HECTD3 se han asociado con fenotipos relacionados con el cáncer y con mecanismos de enfermedad mediados por el sistema inmunitario, lo que respalda su uso en modelos para el análisis de vías.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO HECTD3 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen HECTD3 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del HECTD3 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de HECTD3 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína HECTD3.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en HECTD3 para la investigación de la señalización de HECTD3, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de HECTD3 críticos para la función de HECTD3
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de HECTD3 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido HECTD3 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido HECTD3 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus HECTD3. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR HECTD3 (h) y el plásmido HDR HECTD3 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología HECTD3 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana HECTD3 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.