HCN2CRISPR激活质粒(h): sc-405074-ACT

HCN2 编码超极化激活的环核苷酸门控通道 2（hyperpolarization-activated cyclic nucleotide–gated channel 2），是一种形成孔道的亚基，负责传导 Ih 电流，并将膜超极化与去极化方向的内向阳离子通量相耦联。通过整合电压感受与环核苷酸的直接调控，HCN2 有助于微调神经元兴奋性、起搏活动以及节律性放电特性，从而影响信号整合与网络振荡。HCN2 的功能与 cAMP/PKA 相关信号以及更广泛的电生理程序相交织，共同塑造突触反应性与依赖兴奋性的基因调控。HCN2 表达或通道活性失调与兴奋性改变表型相关，这些表型与神经系统及感觉系统疾病具有相关性，因此支持在兴奋性组织与疾病相关细胞模型中开展机制研究。

HCN2 CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性HCN2的表达。

HCN2 CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的HCN2基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于HCN2转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性HCN2表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的HCN2位点，并能够研究内源性位点上依赖于HCN2的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在HCN2表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟HCN2通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。