HAPLN1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403874-ACT

HAPLN1 (proteína de ligação 1 do hialuronano e de proteoglicanos) é uma glicoproteína da matriz extracelular que estabiliza agregados de hialuronano com proteoglicanos de sulfato de condroitina, apoiando a organização da matriz e a biomecânica dos tecidos. É mais conhecida por suas funções na cartilagem e em tecidos conjuntivos, onde ajuda a manter a integridade da matriz pericelular e influencia a adesão celular, a migração e a mecanotransdução. A função de HAPLN1 se cruza com programas de remodelação da MEC e vias de sinalização que respondem à composição da matriz, incluindo cascatas dependentes de integrinas e de fatores de crescimento. A expressão desregulada de HAPLN1 e a montagem da matriz têm sido associadas a processos degenerativos e fibróticos e são frequentemente avaliadas em estudos de interações tumor–estroma e da remodelação do nicho metastático.

HAPLN1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de HAPLN1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

HAPLN1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus HAPLN1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição HAPLN1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de HAPLN1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus HAPLN1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de HAPLN1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via HAPLN1 em células tumorais com expressão de HAPLN1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.