Não são dados CRISPR: a imagem ilustra a qualidade do anticorpo para visualizar os resultados da experiência CRISPR.
Não são dados CRISPR: a imagem ilustra a qualidade do anticorpo para visualizar os resultados da experiência CRISPR.
GβL Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-425272
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- GβL O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico GβL, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:GβL Anticorpo (E-9): sc-514982
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
GβL Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-425272 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
Mlst8 codifica a proteína GβL (mLST8), um componente central tanto dos complexos mTORC1 quanto mTORC2, que estabiliza a quinase mTOR e sustenta a montagem dos complexos e a saída de sinalização. Por meio desses complexos, a GβL influencia a detecção de nutrientes e fatores de crescimento, o controle translacional, a autofagia e a regulação do citoesqueleto, integrando vias a montante como PI3K–AKT e relacionadas. Em sistemas murinos, a perturbação de Mlst8 é utilizada para investigar como a sinalização de mTOR coordena o crescimento celular, o metabolismo e as respostas ao estresse em diferentes tecidos e contextos de desenvolvimento. A atividade desregulada da via mTOR é amplamente implicada na biologia de doenças proliferativas e metabólicas, tornando Mlst8 um nó útil para estudos mecanísticos de dependência de via e de reconfiguração de redes de sinalização.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO GβL (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Mlst8 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Mlst8, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Mlst8 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína GβL.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Mlst8 para a investigação da sinalização de GβL, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Mlst8 críticos para a função GβL
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Mlst8 para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo GβL Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo GβL Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Mlst8. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo GβL Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR GβL (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Mlst8 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Mlst8 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.