Plásmido CRISPR de Activación (m) G_{α q}: sc-420601-ACT

Gnaq codifica la subunidad alfa Gαq de las proteínas G heterotriméricas, un transductor clave de señales procedentes de muchos receptores acoplados a proteína G (GPCR) hacia la activación de la fosfolipasa Cβ (PLCβ). La hidrólisis de PIP2 impulsada por Gαq genera IP3 y DAG, lo que promueve la movilización de Ca2+ intracelular, la señalización de la proteína quinasa C y efectos más amplios sobre programas transcripcionales dependientes de MAPK/ERK. En células y tejidos de ratón, la actividad de Gαq ayuda a coordinar procesos como la contracción del músculo liso, la secreción y la excitabilidad neuronal mediante redes de señalización GPCR–Ca2+. La desregulación de la señalización de GNAQ/Gαq se ha asociado en la literatura con contextos anómalos de señalización proliferativa e inflamatoria y se estudia con frecuencia por sus funciones en la regulación vascular e inmunitaria, así como por el entrecruzamiento con vías oncogénicas.

Gα q El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Gnaq sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Gα q El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Gnaq en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Gnaq, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Gα q. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Gnaq y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Gα q en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Gα q en células tumorales con expresión de Gnaq silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.