G_{α i-2} Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400568

Visão geral

GNAI2 codifica a subunidade alfa inibitória da proteína G humana Gαi-2, um transdutor central da sinalização por GPCR que suprime a atividade da adenilil ciclase para reduzir o cAMP intracelular e modula respostas a jusante ligadas a PKA e MAPK. Por meio do acoplamento a diversos receptores, a Gαi-2 influencia a sinalização de cálcio, a regulação de canais iônicos, a quimiotaxia e a remodelação do citoesqueleto, moldando a migração celular e programas de ativação de células imunes. Alterações na sinalização de GNAI2 têm sido associadas a vias inflamatórias desreguladas e a sinalização proliferativa aberrante observada em múltiplos contextos de doença, incluindo cânceres e distúrbios relacionados ao sistema imune. Essas propriedades tornam GNAI2 um ponto útil para dissecar a arquitetura das vias de GPCR, a dinâmica de segundos mensageiros e a plasticidade de sinalização dependente do contexto em células humanas.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Gα i-2 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene GNAI2 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do GNAI2, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do GNAI2 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Gα i-2.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de GNAI2 para a investigação da sinalização de Gα i-2, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) GNAI2 críticos para a função Gα i-2
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos GNAI2 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo Gα i-2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo Gα i-2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus GNAI2. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo Gα i-2 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR Gα i-2 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia GNAI2 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo GNAI2 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.