Plasmide CRISPR/Cas9 KO GRSF-1 (h): sc-405858

Présentation

GRSF1 code pour GRSF-1, une protéine se liant à l’ARN enrichie dans les mitochondries, qui reconnaît des éléments d’ARN riches en guanine (G) et soutient le contrôle post-transcriptionnel de l’expression des gènes mitochondriaux. Elle participe au traitement, à la stabilité et à la traduction des ARN mitochondriaux, influençant ainsi la phosphorylation oxydative, la fonction du ribosome mitochondrial et la bioénergétique cellulaire. Par ces rôles, GRSF-1 fait le lien entre le métabolisme de l’ARN, les réponses au stress et le maintien de l’homéostasie mitochondriale. Une activité altérée de GRSF1 a été étudiée dans des contextes de dysfonctionnement mitochondrial, notamment la neurodégénérescence et le remodelage métabolique associé au cancer, où les programmes d’expression génique mitochondriale sont fréquemment perturbés.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO GRSF-1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène GRSF1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du GRSF1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert GRSF1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine GRSF-1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en GRSF1 pour l'étude de la signalisation de GRSF-1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de GRSF1 essentiels à la fonction de GRSF-1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de GRSF1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le GRSF-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le GRSF-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus GRSF1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le GRSF-1 plasmide HDR (h) et le GRSF-1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie GRSF1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles GRSF1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.