GROβ Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-416416-ACT

CXCL2 codifica a oncogene beta regulado por crescimento (GROβ), uma quimiocina CXC que sinaliza principalmente por meio do CXCR2 para promover a quimiotaxia, a adesão e a ativação de neutrófilos durante respostas inflamatórias agudas. A expressão de GROβ é induzida pela atividade das vias NF-κB e MAPK a jusante de recetores de reconhecimento de padrões e de citocinas pró-inflamatórias, ligando a deteção imunitária inata ao recrutamento de leucócitos. Em microambientes teciduais, CXCL2 contribui para a amplificação de redes de citocinas e quimiocinas que moldam o tráfego de células mieloides, sinais angiogénicos e a comunicação cruzada entre estroma e sistema imunitário. A desregulação da sinalização CXCL2/GROβ é frequentemente estudada em doenças inflamatórias e na inflamação associada a tumores, onde a infiltração de neutrófilos e de células mieloides pode influenciar fenótipos relacionados com a doença.

GROβ O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CXCL2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

GROβ O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CXCL2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CXCL2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de GROβ. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CXCL2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de GROβ no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via GROβ em células tumorais com expressão de CXCL2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.