gremlin-1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-423885-ACT

O Grem1 de camundongo codifica a gremlin-1, um antagonista secretado da família DAN que se liga a BMP2, BMP4 e BMP7 para modular a sinalização da superfamília BMP/TGF-β e a transcrição downstream dependente de SMAD. Ao restringir a atividade de BMP, a gremlin-1 influencia o padrão embrionário, as interações epitélio–mesênquima e a homeostase tecidual, podendo também moldar a remodelação da matriz extracelular e o crosstalk entre estroma e parênquima. A expressão desregulada de Grem1 está associada a programas de desenvolvimento alterados e a processos relacionados à fibrose, sendo frequentemente estudada em contextos nos quais a sinalização de BMP governa o comprometimento de linhagens e a regulação do microambiente. Em modelos murinos, Grem1 oferece um ponto de intervenção viável para dissecar a dinâmica da via BMP ao longo da organogênese e de estados de remodelação relevantes para doenças.

gremlin-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Grem1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

gremlin-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Grem1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Grem1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de gremlin-1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Grem1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de gremlin-1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via gremlin-1 em células tumorais com expressão de Grem1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.