GRB14 Double Nickase Plasmid (h): sc-405224-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das GRB14 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- GRB14 Double-Nickase-Plasmid (h) und GRB14 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf GRB14 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
GRB14 Double Nickase Plasmid (h) | sc-405224-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GRB14 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-405224-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GRB14 (Growth-Factor-Receptor-bound Protein 14) ist ein Adapterprotein, das an aktivierte Rezeptor-Tyrosinkinasen bindet und eine wichtige Rolle bei der Modulation der Signalübertragung des Insulinrezeptors und des IGF1R spielt. Durch die Interaktion mit Phosphorylierungsstellen des Rezeptors und nachgeschalteten Effektoren beeinflusst GRB14 den Output der PI3K–AKT- und MAPK-Signalwege und prägt damit den zellulären Stoffwechsel, die Proliferation und die Rückkopplungsregulation. Eine veränderte GRB14-Aktivität wurde mit einer dysregulierten Insulinsignalgebung und metabolischen Phänotypen in Verbindung gebracht; zudem ist sein Signalkontext auch für wachstumsfaktorgetriebene Zellzustände relevant, wie sie in der Krebsbiologie untersucht werden. Als gerüstähnlicher Regulator stellt GRB14 einen gut zugänglichen Knotenpunkt dar, um Mechanismen der Feinabstimmung von Signalwegen und der Signalabschächung in menschlichen Zellen zu untersuchen.
GRB14 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des GRB14-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von GRB14 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die GRB14-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit GRB14-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.