Plasmide CRISPR/Cas9 KO GRAMD1C (h): sc-412329

Présentation

GRAMD1C (GRAM domain containing 1C) code une protéine de transfert lipidique ancrée au réticulum endoplasmique, impliquée dans le transport non vésiculaire des stérols et l’homéostasie intracellulaire du cholestérol. Grâce à la détection membranaire dépendante de son domaine GRAM et à son interaction avec des membranes riches en lipides, GRAMD1C est associée à la biologie des sites de contact entre le RE et d’autres organites ainsi qu’à la régulation de la composition lipidique des membranes. Ces processus s’entrecroisent avec des voies contrôlant la fonction mitochondriale, l’autophagie/la mitophagie et le métabolisme énergétique cellulaire, faisant de GRAMD1C un nœud pertinent pour étudier le dialogue entre organites induit par les lipides. Des altérations de l’expression ou de la fonction de GRAMD1C ont été explorées dans le cadre de phénotypes métaboliques et d’états cellulaires associés au cancer, ce qui soutient sa pertinence pour des études mécanistiques du métabolisme lipidique dans des modèles de maladie.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO GRAMD1C (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène GRAMD1C dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du GRAMD1C, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert GRAMD1C à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine GRAMD1C.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en GRAMD1C pour l'étude de la signalisation de GRAMD1C, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de GRAMD1C essentiels à la fonction de GRAMD1C
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de GRAMD1C pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le GRAMD1C plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le GRAMD1C plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus GRAMD1C. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le GRAMD1C plasmide HDR (h) et le GRAMD1C (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie GRAMD1C pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles GRAMD1C définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.