Plasmide CRISPR/Cas9 KO GRAMD1B (h): sc-408929

Présentation

GRAMD1B (GRAM domain-containing 1B) est une protéine de transfert du cholestérol ancrée au réticulum endoplasmique (RE) qui participe au transport lipidique non vésiculaire aux sites de contact entre le RE et la membrane plasmique. En se liant au cholestérol accessible via son domaine de type StART et en répondant aux signaux des phosphoinositides à la membrane plasmique, GRAMD1B contribue à l’homéostasie du cholestérol, à l’organisation membranaire et à la signalisation dépendante des lipides. Ces processus recoupent la détection des stérols, les réponses au stress du RE et une régulation métabolique plus large qui influence les programmes de croissance et de survie cellulaires. Des altérations de l’expression ou de l’activité de GRAMD1B ont été étudiées dans des contextes de dérégulation du métabolisme lipidique et de signalisation associée au cancer, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques de biologie des membranes.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO GRAMD1B (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène GRAMD1B dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du GRAMD1B, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert GRAMD1B à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine GRAMD1B.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en GRAMD1B pour l'étude de la signalisation de GRAMD1B, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de GRAMD1B essentiels à la fonction de GRAMD1B
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de GRAMD1B pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le GRAMD1B plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le GRAMD1B plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus GRAMD1B. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le GRAMD1B plasmide HDR (h) et le GRAMD1B (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie GRAMD1B pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles GRAMD1B définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.