Plasmide Double Nickase (h) GRAMD1A: sc-408934-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) GRAMD1A correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide GRAMD1A Double Nickase (h) et le plasmide GRAMD1A Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant GRAMD1A. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) GRAMD1A | sc-408934-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) GRAMD1A | sc-408934-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GRAMD1A code une protéine de transfert de lipides contenant un domaine GRAM, localisée aux sites de contact entre le réticulum endoplasmique et la membrane plasmique, où elle contribue au transport non vésiculaire du cholestérol et au maintien de l’homéostasie lipidique membranaire. En détectant le cholestérol accessible et en coordonnant le déplacement des stérols, GRAMD1A soutient la composition des membranes, la compétence en signalisation et la communication entre organites, reliant la disponibilité des lipides aux réponses cellulaires au stress. Ces processus recoupent des voies qui contrôlent le trafic membranaire, l’adaptation métabolique et les microdomaines de signalisation dépendants du cholestérol. Une dérégulation de la gestion du cholestérol et de la biologie des sites de contact est fréquemment associée à des traits cardiométaboliques et au remodelage membranaire des cellules tumorales, ce qui fait de GRAMD1A un nœud pertinent pour des études mécanistiques de phénotypes pilotés par les lipides.
GRAMD1A Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GRAMD1A dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GRAMD1A. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GRAMD1A. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GRAMD1A.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.