Não são dados CRISPR: a imagem ilustra a qualidade do anticorpo para visualizar os resultados da experiência CRISPR.
Não são dados CRISPR: a imagem ilustra a qualidade do anticorpo para visualizar os resultados da experiência CRISPR.
GPR43 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401858
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- GPR43 O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico GPR43, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:GPR43 Anticorpo (3B3): sc-293202
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
GPR43 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-401858 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
FFAR2 codifica o GPR43, um receptor acoplado à proteína G (GPCR) sensível a ácidos graxos de cadeia curta (AGCC), ativado por acetato, propionato e butirato produzidos pela microbiota intestinal. O GPR43 acopla-se principalmente às vias de Gαi/o e Gαq para modular a sinalização de AMPc, o fluxo de cálcio intracelular e respostas downstream de MAPK/ERK, moldando a quimiotaxia, a produção de citocinas e a regulação imune associada à barreira. É expresso de forma proeminente em células imunes como neutrófilos e macrófagos e em tecidos metabólicos, conectando metabólitos microbianos a programas de homeostase inflamatória e energética. A sinalização desregulada de FFAR2/GPR43 tem sido associada a doenças inflamatórias e fenótipos metabólicos, sustentando estudos mecanísticos da sinalização hospedeiro–microbioma em contextos relevantes para doenças.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO GPR43 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene FFAR2 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do FFAR2, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do FFAR2 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína GPR43.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de FFAR2 para a investigação da sinalização de GPR43, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) FFAR2 críticos para a função GPR43
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos FFAR2 para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo GPR43 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo GPR43 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus FFAR2. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo GPR43 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR GPR43 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia FFAR2 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo FFAR2 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.