GPR40 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h2): sc-401434-LAC-2

O FFAR1 humano (GPR40) codifica um recetor acoplado à proteína G para ácidos gordos livres de cadeia média e longa, que se acopla principalmente à Gαq/11 para promover a ativação da fosfolipase C, a mobilização intracelular de Ca2+ e a sinalização a jusante via PKC/MAPK. Nas células β pancreáticas e noutros tecidos metabolicamente ativos, o GPR40 atua como um sensor de nutrientes, ligando a disponibilidade de lípidos a respostas secretoras reguladas e a um controlo mais amplo da homeostase glicose–lípidos. Alterações na sinalização do FFAR1 têm sido implicadas na desregulação metabólica, incluindo defeitos de secreção de insulina associados à obesidade e fenótipos relevantes para a diabetes tipo 2, e também têm sido exploradas em contextos como a inflamação e o metabolismo do cancro. A edição genética do FFAR1 permite a dissecação mecanística da sinalização de ácidos gordos via GPCR, a investigação do acoplamento estímulo–secreção nas células β e o mapeamento de vias em modelos celulares usando ensaios transcriptómicos, fosfoproteómicos e funcionais.

As Partículas de Ativação Lentivirais GPR40 (h2) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de FFAR1 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais GPR40 (h2) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição FFAR1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de GPR40. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo FFAR1 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.