GPR174 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-413678-ACT

GPR174 (também conhecido como receptor de lisofosfatidilserina) é um receptor acoplado à proteína G enriquecido em células imunes e implicado na regulação da ativação de linfócitos, da produção de citocinas e da homeostase imunológica. Após a ligação do ligante, ele pode acoplar-se à sinalização dependente de Gαs, influenciando a produção de cAMP e programas transcricionais a jusante que moldam os estados funcionais de células T e células B. A atividade de GPR174 cruza-se com vias mais amplas controladas por GPCRs que governam migração, limiares de ativação e redes de sinalização inflamatória. A expressão ou sinalização desregulada de GPR174 tem sido associada à biologia de doenças imunomediadas e oferece um ponto de entrada mecanístico para estudar a imunorregulação em modelos celulares humanos.

GPR174 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de GPR174 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

GPR174 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus GPR174 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição GPR174, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de GPR174. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus GPR174 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de GPR174 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via GPR174 em células tumorais com expressão de GPR174 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.