Plasmide CRISPR/Cas9 KO GPR119 (m): sc-433515

Présentation

Gpr119 code pour GPR119, un RCPG de classe A enrichi dans les cellules des îlots pancréatiques et les populations entéroendocrines intestinales, où il se couple principalement à la signalisation via Gs afin d’augmenter l’AMPc intracellulaire. Cette voie soutient des réponses de détection des nutriments qui influencent la libération d’incrétines, la dynamique de sécrétion d’insuline et, plus largement, la régulation de l’homéostasie du glucose et des lipides. Dans les tissus immunitaires et métaboliques, la signalisation dépendante de GPR119 a été associée à la modulation de l’équilibre énergétique cellulaire et à une communication hormonale entre l’intestin et le pancréas. La dérégulation des réseaux associés à GPR119 est donc étudiée dans le contexte de phénotypes métaboliques, notamment des voies liées à l’obésité et au diabète, ainsi que de la fonction des cellules endocrines.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO GPR119 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Gpr119 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Gpr119, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Gpr119 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine GPR119.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Gpr119 pour l'étude de la signalisation de GPR119, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Gpr119 essentiels à la fonction de GPR119
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Gpr119 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le GPR119 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le GPR119 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Gpr119. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le GPR119 plasmide HDR (m) et le GPR119 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Gpr119 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Gpr119 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.