GPI-PLD Double Nickaseプラスミド (h): sc-404938-NIC

GPLD1は、グリコシルホスファチジルイノシトール（GPI）特異的ホスホリパーゼD1（GPI-PLD）をコードしています。GPI-PLDは分泌型酵素で、GPIアンカーを加水分解し、細胞膜に結合したGPIアンカー型タンパク質が細胞膜から細胞外区画へ放出される過程を調節します。多様なGPIアンカー型タンパク質の膜結合性を調節することで、GPI-PLDは細胞間シグナル伝達、免疫関連プロセス、ならびに組織をまたいだ脂質結合タンパク質の輸送に影響を及ぼし得ます。GPLD1の発現および循環中のGPI-PLD活性は、インスリン抵抗性、肝臓関連経路、全身性の免疫調節との関連を含む代謝・炎症生物学の文脈で検討されてきました。こうした機能的関連性から、GPLD1はGPIアンカーのターンオーバー、細胞外酵素活性、プロテオーム再構成の機構研究における有用な標的となります。

GPI-PLD ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における GPLD1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、GPLD1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、GPLD1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、GPLD1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。