gp91phox Double Nickaseプラスミド (m): sc-419890-NIC
- 対象生物種: mouse
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- gp91phox Double Nickaseプラスミド (m)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- gp91phoxダブルニカースプラスミド（m）およびgp91phoxダブルニカースプラスミド（m2）は、Cybbを標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
gp91phox Double Nickaseプラスミド (m) | sc-419890-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
gp91phox Double Nickaseプラスミド (m2) | sc-419890-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
マウスCybbは、食細胞NADPHオキシダーゼ複合体の触媒性膜サブユニットであるgp91phox（NOX2）をコードしており、NADPHから分子状酸素へ電子を移動させてスーパーオキシドおよび下流の活性酸素種（ROS）を産生します。この酸化バーストは、抗微生物防御、レドックス依存性シグナル伝達、ならびにファゴソーム成熟やサイトカイン産生に影響する経路を介した炎症応答の制御を支えます。gp91phoxの活性には、p22phoxおよびp47phox、p67phox、Rac GTPaseなどの細胞質因子が細胞膜上で集合することが必要です。Cybb依存的なROS産生の破綻は、免疫不全や炎症性表現型に関連する自然免疫機能の変化および酸化ストレス機構を、マウス系でモデル化するために広く用いられています。
gp91phox ダブルニカースプラスミド（m）は、mouse 細胞株における Cybb 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Cybb内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Cybbの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Cybbが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。