golgin 97 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403152-ACT

GOLGA1 codifica a golgina 97, uma proteína periférica de membrana com estrutura em coiled-coil, enriquecida na rede trans-Golgi (TGN), que ajuda a manter a arquitetura do Golgi e dá suporte ao ancoramento (tethering) de vesículas durante o tráfego pós-Golgi. Ao coordenar a triagem de cargas e as vias de transporte retrógrado entre o Golgi, os endossomos e a membrana plasmática, a golgina 97 contribui para a homeostase de membranas e para a fidelidade da organização da via secretória. A perturbação de fatores de ancoramento e tráfego do Golgi está associada a alterações na reciclagem de receptores, respostas a estresse e à relocalização incorreta de enzimas de glicosilação — processos frequentemente investigados em neurodegeneração, biologia de infecções e fenótipos de células cancerosas. Como marcador e regulador da dinâmica do TGN, a golgina 97 é comumente estudada em ensaios de estrutura de organelas, cinética do transporte vesicular e proteostase sob estresse celular.

golgin 97 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de GOLGA1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

golgin 97 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus GOLGA1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição GOLGA1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de golgin 97. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus GOLGA1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de golgin 97 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via golgin 97 em células tumorais com expressão de GOLGA1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.