GnRH I Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401425
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- GnRH I O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico GnRH I, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:GnRH I Anticorpo (HU11B): sc-32292
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
GnRH I Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-401425 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
GNRH1 codifica o hormônio liberador de gonadotrofinas I (GnRH I), um decapeptídeo hipotalâmico que inicia a sinalização pulsátil para as células gonadotróficas da hipófise por meio do GPCR GnRHR, ativando as vias da fosfolipase C/IP3–DAG/Ca2+ e a ativação de MAPK. Essa sinalização regula a síntese e a secreção do hormônio luteinizante e do hormônio folículo-estimulante, coordenando a função do eixo reprodutivo, o timing da puberdade e a fertilidade. Alterações na expressão de GNRH1 ou no processamento do peptídeo têm sido implicadas em distúrbios da regulação do eixo hipotálamo–hipófise–gonadal, incluindo o hipogonadismo hipogonadotrófico congênito e fenótipos endócrinos reprodutivos relacionados. Em modelos celulares e teciduais, GNRH1 é estudado em relação à diferenciação neuroendócrina, à dinâmica de secreção hormonal e ao controle transcricional de programas de sinalização reprodutiva.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO GnRH I (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene GNRH1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do GNRH1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do GNRH1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína GnRH I.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de GNRH1 para a investigação da sinalização de GnRH I, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) GNRH1 críticos para a função GnRH I
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos GNRH1 para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo GnRH I Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo GnRH I Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus GNRH1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo GnRH I Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR GnRH I (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia GNRH1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo GNRH1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.