GMF-γ Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-425658-ACT

Gmfg codifica o fator de maturação glial gama (GMF-γ), uma proteína reguladora de actina enriquecida em células hematopoéticas que modula a remodelação do citoesqueleto, alterações na forma celular e migração direcional. O GMF-γ influencia a dinâmica da actina dependente de Arp2/3 e está implicado em processos como quimiotaxia de leucócitos, adesão e eventos de sinalização que coordenam o tráfego de células inflamatórias e imunes. Em modelos murinos e em células imunes primárias, alterações na atividade de GMF-γ têm sido associadas a um comportamento desregulado de células mieloides e linfoides, tornando-o relevante para o estudo de vias subjacentes à inflamação e às respostas teciduais mediadas pelo sistema imune. Essas características posicionam o GMF-γ como um ponto útil para dissecar a sinalização associada à migração e a homeostase das redes de actina em pesquisas biomédicas.

GMF-γ O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Gmfg sem alterar a sequência de ADN subjacente.

GMF-γ O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Gmfg em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Gmfg, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de GMF-γ. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Gmfg nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de GMF-γ no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via GMF-γ em células tumorais com expressão de Gmfg silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.