GlyR α1 Double Nickase Plasmid (h): sc-404734-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das GlyR α1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- GlyR α1 Double-Nickase-Plasmid (h) und GlyR α1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf GLRA1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: GlyR α1: sc-293498
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
GlyR α1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-404734-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GlyR α1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-404734-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GLRA1 kodiert die Alpha-1-Untereinheit (GlyR α1) des Glycinrezeptors, eines ligandengesteuerten Chloridkanals, der eine schnelle inhibitorische Neurotransmission im Rückenmark, Hirnstamm und weiteren Regionen des ZNS vermittelt. Nach Bindung von Glycin trägt GlyR α1 zum Chlorideinstrom und zur Hyperpolarisation der Membran bei und formt dadurch die synaptische Inhibition sowie die Erregbarkeit motorischer Schaltkreise. Der Rezeptor ist an der Signalübertragung über neurotransmittergesteuerte Ionenkanäle und an der Funktion inhibitorischer Synapsen beteiligt, mit nachgeschalteten Effekten auf die Schwellen für neuronales Feuern und die Synchronisation neuronaler Netzwerke. Genetische Variation oder Funktionsstörungen in GLRA1 sind mit einem veränderten inhibitorischen Tonus assoziiert und wurden mit Schreck-/Hyperekplexie-Phänotypen sowie verwandten neurophysiologischen Auffälligkeiten in Verbindung gebracht, die für Modelle der motorischen Kontrolle und sensorischen Verarbeitung relevant sind.
GlyR α1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des GLRA1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von GLRA1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die GLRA1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit GLRA1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.