Plásmido Doble Nickase (h) Glutathione Peroxidase 5/GPX5: sc-405279-NIC

El GPX5 humano codifica la glutatión peroxidasa 5, una enzima antioxidante dependiente de selenio que reduce el peróxido de hidrógeno y los hidroperóxidos lipídicos utilizando glutatión para limitar el daño oxidativo. La actividad de GPX5 contribuye a la homeostasis redox y ayuda a restringir los efectos impulsados por el estrés oxidativo sobre la integridad de las membranas, la oxidación de proteínas y las vías de señalización posteriores vinculadas a la inflamación y la apoptosis. Aunque GPX5 se caracteriza mejor en el tracto reproductor masculino, su regulación y función antioxidante la conectan con respuestas celulares más amplias frente a las especies reactivas de oxígeno y el daño oxidativo. El control redox desregulado en el que participan las glutatión peroxidasas se estudia con frecuencia en contextos como la infertilidad, el estrés metabólico y la biología tumoral, donde las especies reactivas de oxígeno influyen en la estabilidad genómica y en las decisiones sobre el destino celular.

Glutathione Peroxidase 5/GPX5 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus GPX5 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de GPX5. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de GPX5. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con GPX5 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.