Glucose Transporter Glut1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400174-ACT

SLC2A1 codifica o transportador de glicose 1 (GLUT1), um transportador de membrana facilitador que medeia a captação basal de glicose através da membrana plasmática e sustenta o fluxo glicolítico sob diversas condições de nutrientes. A atividade do GLUT1 está intimamente ligada à homeostase energética, ao metabolismo responsivo à hipóxia e à entrada de carbono em vias biossintéticas, como a via das pentoses fosfato, para controlo redox e produção de nucleótidos. A regulação de SLC2A1 cruza-se com programas de sinalização e transcrição, incluindo respostas dependentes de HIF-1 e uma reprogramação metabólica mais ampla durante o stress celular. Alterações na expressão de GLUT1 e na utilização de glicose são amplamente estudadas em contextos de disfunção metabólica e remodelação proliferativa, oferecendo uma base mecanística para investigar fenótipos dependentes do transporte de nutrientes.

Glucose Transporter Glut1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SLC2A1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Glucose Transporter Glut1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SLC2A1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SLC2A1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Glucose Transporter Glut1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SLC2A1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Glucose Transporter Glut1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Glucose Transporter Glut1 em células tumorais com expressão de SLC2A1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.